目的：初步探讨自噬活性降低对TM3小鼠睾丸间质细胞系睾酮合成功能的影响。方法 TM3小鼠睾丸间质细胞系中，通过siRNA敲减TM3细胞的自噬相关基因Beclin1，一部分细胞转染GFP-LC3质粒48h后共聚焦显微镜观察GFP颗粒分布情况，一部分细胞用电镜观察其超微结构变化，观察自噬相关结构的变化，另一部分细胞用黄体生成素（LH）刺激后，提取细胞总蛋白，用Western blot比较青年组和老年组睾丸间质细胞中自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平的差异，ELISA法检测细胞上清睾酮浓度，分光光度法检测活性氧物质（ROS）。结果利用siRNA敲减自噬相关基因Beclin 1后，TM3细胞中LC3-Ⅱ的蛋白表达降低（P ＜0.01）（图1A），电镜下观察并分析发现，TM3细胞中自噬小体所占面积比减少（P ＜0.01）（图1B），共聚焦显微镜下观察发现，GFP- LC3的点状荧光所占面积比显著减少（P＜0.01）（图1C）。TM3细胞中敲减Beclin 1导致LH诱导的StAR蛋白表达降低（P＜0.01）（图2A），睾酮合成水平下降（P＜0.01）（图2B），ROS水平升高（P＜0.01）（图3）。结论 TM3小鼠睾丸间质细胞系中，利用siRNA敲减自噬相关基因Beclin 1后，细胞自噬受到抑制，ROS水平显著升高，LH诱导的StAR蛋白表达及睾酮合成显著降低。
作者：李维仁；侯垒；崔功静；常智杰；贾金铭；辛钟成
来源：中国男科学杂志 2013 年 12期
