目的 构建和鉴定针对黏蛋白1(MUC1)特异性的siRNA表达载体.方法 人工合成一对互补并编码相应短发夹状MUG1-siRNA的寡核苷酸链,将其插入pGC sileneer~(TM) U6/Neo/RNAi质粒载体中,用双酶切、阳性克隆聚合酶链反应(PER)鉴定及DNA测序鉴定所构建的重组载体是否正确;以脂质体法将构建的重组载体导入人胆管癌细胞QBC939中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测转染细胞中MUC1 mRNA和蛋白的表达.结果双酶切、PER鉴定及DNA测序证实MUC1-siRNA真核表达载体构建成功,转染该载体后的QBC939(干扰组)中MUC1 mRNA 及其蛋白质表达水平明显下调(P<0.05).结论 成功构建的特异性siRNA表达载体,转染QBC939后可特异性地封闭MUC1的表达,为进一步研究MUC1-siRNA载体提供了实验基础.
作者：李灼日；李振振；李诤；吴金术
来源：中国普通外科杂志 2010 年 19卷 2期
