目的 本试验旨在表达纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白,使用临床样本初步评估其在免疫学诊断结核病(tu-berculosis,TB)中 的应用价值.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增出mpt83基因,连接到pET-21a(+)中构建原核表达载体,转入感受态细胞DH5α,进行菌落PCR筛选阳性克隆.提取菌落PCR为阳性菌株的重组质粒pET-mpt83,对其进行双酶切鉴定,并将阳性克隆进行测序.将测序正确的质粒转入BL21感受态细胞中进行诱导、表达后通过镍柱亲和层析法纯化.使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及免疫印迹(Western Blot)鉴定纯化产物.用纯化MPT83蛋白免疫小鼠制备鼠多克隆抗血清.分别收集8例临床诊断结核性胸膜炎患者(TB组)的胸水和血浆,8例腺癌患者(CA组)的胸水和血浆以及8名健康对照者(HC组)的血浆.采用间接ELISA法检测样本中识别MPT83蛋白的特异性抗体水平.结果 成功表达纯化出结核分枝杆菌MPT83蛋白.MPT83鼠多克隆抗血清效价可高达1 ∶1 280 000.TB组血浆MPT83抗原特异性抗体水平显著高于HC组,差异有统计学意义(P＜0.05);而CA组血浆中抗原特异性抗体水平与HC组之间差异无统计学意义(P＞0.05).TB组和CA组的胸水与HC组之间差异无统计学意义(P＞0.05).利用ROC曲线分析不同稀释度下TB组血浆和HC组血浆OD
作者：阮锦洋；祁弋暄；杜凤娇；李浩
来源：中国热带医学 2023 年 23卷 2期
