目的构建抗华支睾吸虫噬菌体抗体库,以期筛选出抗循环抗原的抗体组合。方法应用噬菌体表面呈现技术,从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA后,用相应引物PCR扩增出重链Fd和轻链基因,经Xho I和Spel、Sac I和Xba I双酶切,先后克隆入噬粒载体pComb3,再电转化大肠杆菌XL1-blue菌株,辅助噬菌体VCSM13超感染。结果从感染华支睾吸虫病人淋巴细胞中扩增出约700bp重链γ1、γ3Fd段和轻链κ、λ基因,分别和pComb3连接后成功导入XL1-blue,得到滴度为7.5×1010cfu/ml,库容量为5.6×106噬菌体抗体库。结论抗华支睾吸虫Fab段噬菌体抗体库的构建,为进一步筛选抗华支睾吸虫循环抗原单克隆抗体奠定了基础。
作者:俞慕华;陈代雄;王轶;何蔼;梁瑜;黎宝玲;潘恩信;詹希美
来源:中国人兽共患病杂志 2000 年 16卷 6期