目的构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,建立基因敲除突变株,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法.方法用基因克隆方法将 SAG3 1.53kb和 2.81kb 两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,氯霉素乙酰转移酶( CAT) 抗性基因作为筛选标记,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶,建立突变型的弓形虫株,采用PCR、酶切分析和Southern Blot 杂交方法筛选鉴定. 结果构建了弓形虫RH株5 'SAG3-TUB5/CAT-3 ' SAG3置换型载体,获得了敲除SAG3 基因的弓形虫突变株,建立基因敲除突变株,获得了阳性的筛选克隆,经鉴定证明基因打靶结果准确.结论通过构建基因打靶载体,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因,为进一步研究弓形虫侵入机制,探讨弓形虫病防治提供可行的方法.
作者：韦相才；钟兴明；郑焕钦；陈观今；王景圆
来源：中国人兽共患病杂志 2004 年 20卷 12期
