目的 用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法.方法 根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N.阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间.通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性.用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法.结果 扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的 蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h.重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8
作者：高明华；夏咸柱；薛琳
来源：中国人兽共患病学报 2007 年 23卷 1期
