目的：构建含有人纤维蛋白原基因的毕赤酵母表达系统，实现胞外高效分泌表达。方法全基因合成人纤维蛋白原3个基因FGA、FGB、FGG，构建表达载体pGAPZαA－FGB－FGG－FGA－AOX1，线性化后电转化导入毕赤酵母菌株SMD1168H，抗性筛选获得阳性克隆。发酵液经SDS－PAGE确定蛋白表达部位，ELISA检测目的蛋白表达量。表达产物超滤浓缩后利用AKTA蛋白纯化系统进行分离纯化，Western blot检测蛋白表达情况并对纯化产物进行生物学活性测定。结果基因工程菌株摇瓶培养上清液表达量约15 mg／L，生物学活性分析重组蛋白具有凝集活性。结论成功获得了高效分泌表达重组人纤维蛋白原的毕赤酵母菌株，且分离纯化的蛋白具有生物凝集活性。
作者：郝荣华；张晓元；刘飞；陈勉；王凤山；朱希强；凌沛学
来源：中国生化药物杂志 2016 年 36卷 11期
