为了探讨NADH-细胞色素b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制,研究突变型(b5R)蛋白结构和功能的关系,用基因重组技术将野生型和突变型(C203Y)b5RcDNA克隆于pGEX-2T载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达.Western印迹鉴定所表达的蛋白为GST-b5R融合蛋白.应用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST-b5R和GST-b5RC203Y融合蛋白.比较GST-b5R和GST-b5RC203Y酶活性及稳定性,发现野生型和突变型的酶活性基本相同.但与野生型酶相比,突变型酶对热的稳定性较差,对胰蛋白酶更加敏感.结果提示,C203Y突变可引起蛋白质二级结构改变而导致酶的稳定性下降.
作者:王瑶;吴玉水;兰风华;唐玉钗;朱忠勇
来源:中国生物化学与分子生物学报 2000 年 16卷 4期