目的 对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离及鉴定.方法 Trizol法提取待检胎牛血清中的病毒RNA后,利用套式RT-PCR扩增BVDV,并利用生物信息学Lasergene 7.0软件对其核苷酸序列进行同源性分析.取生长状态良好的MDBK细胞,按1％比例加入待检胎牛血清,收获F1代BVDVFBS2014,反复冻融3次后,再次接种MDBK细胞,连传4代.采用荧光定量RT-PCR法、间接免疫荧光试验及抗原捕获ELISA法对收获的病毒进行鉴定.结果 扩增产物大小均与预期相符,与已报道的BVDV-1NADL株的核苷酸序列一致性为92.2％,属于BVDV-1a亚型毒株;分离的病毒经鉴定为BVDV,命名为BVDV FBS2014,病毒基因拷贝数为104拷贝/μl,感染MDBK细胞可见特异性绿色荧光;各代次的病毒收获液中BVDV的基因拷贝数均大于104.92拷贝/μl,BVDV抗原检测结果均为阳性.结论 购买的进口胎牛血清中成功分离到可致MDBK细胞产生细胞病变的病毒,经鉴定所分离的病毒为BVDV,命名为FBS2014株,该病毒属于BVDV-1a亚型毒株.
作者：王竞晗；李素；何文瑞；赵权；仇华吉
来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 3期
