目的 原核表达与纯化结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)肝素结合血凝黏附素(heparin-bindinghaemagglutinin adhesion,HBHA),并初步评估其在结核病血清学诊断中的价值.方法 采用PCR法从M.tbH37Rv基因组中扩增hbha基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28ah,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组HBHA(rHBHA)蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化后,Western blot法分析其抗原特异性.收集71例确诊的结核病患者和30名健康体检者血清,采用ELISA法检测血清中的抗HBHA IgA、IgG抗体水平,并以ESAT-6、Ag85A作为对照抗原,评估rHBHA在结核病血清学诊断中的价值.结果 重组表达质粒pET-28ah经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,经Ni2+亲和层析柱纯化,可得到高纯度的rHBHA蛋白;纯化的rHBHA蛋白可与小鼠抗His-tag单克隆抗体特异性结合;结核病患者(TB)组血清中抗rHBHA、ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgG水平均显著高于健康对照(HC)组(P＜0.05),且TB组的rHBHA抗原特异性IgA水平也显著高于HC组(P＜0.05),而两组间ESAT-6、Ag85A抗原特异性IgA水平差异无统计学意义(P＞0.05);ROC曲线分析显示,rHBHA抗原检测IgA的诊断效能较好,曲线下面积为0.711,其他两种对照抗原ESAT-6

作者：问寒利；李海聪；李根；赵慧敏；施理敏；韩伟靖；吴康；范小勇

来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 5期