目的 建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳(image capillary isoelectric focusing,iCIEF)方法分析重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)Fc融合蛋白(Fc-rhGH)的电荷异质性,并对方法进行验证.方法 通过对目标蛋白浓度、助溶剂(尿素)浓度、聚焦时间的优化建立Fc-rhGH的iCIEF分析方法.采用该方法与传统平板等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)同时分析目标蛋白,并比较分析结果;对建立的方法进行特异性、准确性、精密性、定量限(limit of quantitation,LOQ)、耐用性验证.结果 优化后的方法为采用8 mol/L尿素、0.35％甲基纤维素(methyl cellulose,MC)、4％两性电解质、0.5％等电点标记物混合溶液为样品缓冲液,聚焦条件为:1 500 V 1 min,3 000 V 5.5 min.IEF不适用于分析Fc-rhGH原液的电荷异质性.采用优化的iCIEF进行分析,目标蛋白能明显区别于非相关蛋白,且空白试剂基线平稳;准确性验证回收率在90％～110％之间,线性范围为0.25～0.75 mg/mL(目标上样量的50％～150％);重复性验证中各异构体pI 的RSD均小于0.3％,峰面积百分比RSD均小于5％;定量限为0.04 mg/mL;方法的样品保存时间耐用性、两性电解质pharmalyte 3-10耐用性和MC耐用性良好.采用该方法分析Fc-rhGH理化对照品的电荷异质性,可有效

作者：马琳琳；刘莹；俞露；朱秋媚；刘涵；毕江坤；张凯宁

来源：中国生物制品学杂志 2023 年 36卷 6期