目的 选择最优的细胞因子组合力案体外制备CIK细胞,为基于CIK细胞的肿瘤免疫治疗提供有价值的数据.方法 采用Ficoll分离法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),PBMC加入激发型鼠抗人抗-CD3单抗(1μg/mL)包被的96孔板(2×106孔),各孔中分别按浓度梯度加入激发型抗-CD28单抗0.25μg/mL、0.5μg/mL、1峭/mL,IL-2 0.02万U/mL,0.1万U/mL,0.5万U/mL,IFN-γ50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL,于1、2、3、4、5、6、7d通过细胞计数计算各孔细胞数量,以确定能获得最佳增殖效果的最低浓度,该浓度即为CIK诱导的合适浓度.获得最适浓度后,采用CCK-8掺入法检测不同诱导方案下CIK细胞体外增殖能力,采用流式细胞术观察在活化的于1、3、5、7d不同诱导方案下CIK上CD4+、CD8+、CD56+的表达.结果 PBMC在细胞因子作用下均能增殖,加入细胞因子后培养至4-5d时,可见细胞体积逐渐增大,培养至7d细胞的胞体和胞核均增大,胞浆增多,胞核密度加强.细胞增殖曲线提示,在抗-CD3单抗浓度为1μgmL下抗-CD28单抗、IL-2、IFN-γ的最适浓度分别为0.5 μg/mk,、0.1万U/mL、100ng/mL.CCK法和流式细胞术分析显示,各组CIK细胞随着培养时间的延长增殖愈显著,且组间呈现统计学差异,各组中以抗-CD3+抗-CD28+IL-2+ IFN-γ联合培养组CIK细胞体外增殖能力最强(P

作者：徐利强；李建华；倪修文；吴马剑；孙亚云；吴瑾惠

来源：中国输血杂志 2015 年 28卷 8期