目的 探究寨卡病毒(ZIKV)感染A549细胞后诱导的小分子非编码RNA-133a-3p (miR-133a-3p)对ZIKV复制的影响及其潜在机制.方法 在1×105/mL腺癌人类肺泡基底上皮细胞系A549中感染ZIKV,感染复数(MOI)为0.5,感染后在不同时间点收取RNA样品,以荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-133a-3p相对表达变化;同时在1×105/mL的A549中,转染3μL的miR-133a-3p模拟物(miR-133a-3pmimic)使miR-133a-3p高表达,转染后24h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100 μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,感染后48 h收取细胞RNA或蛋白样品,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blots)检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和50 ng海肾荧光报告质粒(pRL-TK)与3μL的miR-133a-3p共转入1×105/mL的A549中,转染后24h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100 μg/L的poly Ⅰ∶C处理细胞,在处理48 h后通过双荧光报告实验检测含ISRE序列的萤火虫荧光蛋白表达情况.结果 ZIKV感染可影响A549细胞内miR-133a-3p表达,相对于0h,在8、16、24、36、48和72 h,miR-133a-3p值分别为:0.45±0.048、0.4±0.084、0.52±0.004、0.82±0.229、1.41±0.167、2.86±0.219;miR-133a-3p过表达

作者：任凯；孙红刚；段晓琼；廖鑫忠；陈利民；李世林

来源：中国输血杂志 2020 年 33卷 4期