目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法.方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21( DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法.结果 成功克隆了prn全基因序列,并在E.coli BL21( DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性.应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法.试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1:40.结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础.
作者：胡佳佳；恽时锋；王芳；范志宇；胡波
来源：中国比较医学杂志 2012 年 22卷 2期
