本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性.抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC.用台盼蓝法测定细胞传代成活率,通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC；细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1,并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度.结果表明,经密度梯度分离单个核细胞,在早期贴壁细胞24 h换液时即可见明显集落形成,8d后达80％融合,细胞呈均匀一致的长梭形排列；2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8d可融合近80％,细胞呈多角形,出现条索状结构；2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90％以上,传至第2代后,生长曲线均近似“S”形；MTT法检测显示,细胞生长d3至d5时光密度值变化较明显；MSC G0-G1期为(93.32±1.65)％、EPC G0-G1为(93.05±1.95)％,2种细胞DNA周期无明显差异；早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)％、(99.1±2.33)％

作者：辛毅；刘小希；赵伟；刘飒；李娜；许秀芳；黄益民；罗毅；张宏家

来源：中国实验血液学杂志 2013 年 21卷 3期