目的 构建HBVDNAPTP1基因的原核表达载体,诱导其在大肠埃希菌中表达,并对融合蛋白进行纯化.方法 利用逆转录-PCR获得乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(Polymerase)反式调节人类新基因HBVDNAPTP1,测序正确后插入至原核表达载体Pet-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌进行诱导,并利用组氨酸亲和层析方法对融合蛋白进行纯化.结果 HBVDNAPTP1原核表达载体转化宿主菌后,经0.5 mmol/L IPTG、30 ℃诱导5 h获得了分子量约为31 Kd的HBVDNAPTP1融合蛋白的优化表达,Western blotting证实融合蛋白的特异性.亲和层析纯化后得到较纯的HBVDNAPTP1融合蛋白,每升培养菌液中可获得2.24 mg的纯化蛋白.结论 成功获得纯化的HBVDNAPTP1融合蛋白,为今后开展HBVDNAPTP1的生物学功能研究奠定了物质基础.
作者:阎秀丽;伦永志;王芳;冯洁;迟庆
来源:中国微生态学杂志 2011 年 23卷 3期