目的 构建携EGFP的人低氧诱导因子(HIF-1α)真核表达载体,为研究人HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用奠定基础.方法 采用分子克隆技术,KpnⅠ、XbaⅠ双酶切pcDNA3.1/V5-HisA-HIF-1α获得HIF-1αcDNA,克隆到质粒pcDNA3.1(+),得到质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α,以Kpn Ⅰ,Apa Ⅰ双酶切质粒pcDNA3.1(+)-HFI-1α获得HIF-1αcDNA,克隆到质粒pEGFP-c1得到pEGFP-HIF-1α-c1质粒.脂质体法转染HEK293细胞,用荧光显微镜和Western blottign检测EGFP和HIF-1α在HEK293细胞的表达.均显示融合蛋白在细胞中表达.结果 经酶切鉴定及PCR证实重组pEGFP-HIF-1α-c1质粒构建成功,荧光显微镜和Western blotting显示EGFP和HIF-1α融合蛋白在HEK293细胞中表达.结论 成功构建重组真核表达载体pEGFP-HIF-1α-c1并在HEK293细胞表达,为冠心病的HIF-1基因治疗研究奠定更直观的基础.
作者：谢宜军；吴平生；王月刚；胡英芳；童锴
来源：中国现代医学杂志 2007 年 17卷 5期
