目的 利用Gateway技术构建含人肝细胞生长因子(HGF) NK4基因的重组腺病毒载体.方法 以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因,将回收的NK4 PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4.从该重组质粒上,利用LR同源重组将NK4-IRES-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAD/BL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-NK4-IRES-EGFP.该质粒经pacI线性化后转染293包装细胞,获得重组腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP.采用TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID 50)法测定重组腺病毒滴度.重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定.荧光显微镜观察转染效果.结果 证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的 片段;病毒滴度为6.3×1011 PFU·L-1;荧光显微镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达.结论 利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础.
作者：阙文忠；陈君敏
来源：中国药理学通报 2011 年 27卷 4期
