目的 构建含有人单纯疱疹病毒1型(HSV-1)VP22与人microdystrophin基因融合的重组腺病毒,体外感染成肌细胞C2C12,探讨VP22对microdystrophin基因在成肌细胞中的蛋白转导特性.方法 设计引物,从质粒pSIN-rep5-VP22中扩增VP22全长基因,然后将VP22基因定向插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,获得重组质粒pCMV-VP22:再用Not I酶切含microdystrophin基因的pBSK-micro质粒.获得microdystrophin基因,片段回收后定向插入重组质粒pCMV-VP22,获得重组质粒pCMV-VP22-MICDYS.Pmel线性化重组质粒pCMV-VP22-MICDYS,去磷酸化后回收与腺病毒骨架质粒pAdeany-1共电转化BJ5183感受态细胞.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,脂质体介导转染293细胞,通过观察293细胞病变及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组腺病毒.将含VP22-microdystrophin及microdysfrophin的病毒上清分别转染成肌细胞C2C12,通过RT-PCR、Western-blot和免疫组织化学方法检测microdys-m)phin的mRNA及蛋白表达.结果 成功构建了含有VP22-microdystrophin基因的重组腺病毒,体外感染成肌细胞C2C12,Westem-blot及免疫组织化学检测显示VP22显著提高了microdystrophin蛋白在C2C12细胞中的表达.结论 含有VP22-micrody8trophin基因的重组腺病毒载体的构建及VP22

作者：熊符；张成；郑卉；肖少波；潘永飞；许勇峰；刘正山；李勇

来源：中国医学科学院学报 2008 年 30卷 4期