目的:通过细胞转基因技术,获得稳定表达转化生长因子β1(TGF-β1)的系膜细胞(MC)克隆,观察积雪草(CA)对Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白1V表达及Smad 2/3磷酸化的影响.方法:采用脂质体的方法将TGF-β1表达质粒转入MC细胞,采用G418筛选并建立稳定表达TGF-β1的细胞株.将MC细胞株分为3组:对照组(未转染TGF-β1的MC+ RPMI 1640+ 10％正常大鼠血清),TGF-β1转染组(稳定表达TGF-β1的MC+ RPMI 1640+10％正常大鼠血清),积雪草(CA)组:稳定表达TCF-β1的MC+RPMI 1640+ 10％含高浓度CA的大鼠血清.实验重复5次ELISA法检测各组培养上清中TGF-β1和胶原Ⅳ的含量;RT-PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、Smad7的mRNA表达水平;Western印迹法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、p-Smad 2/3、Smad 7、胶原Ⅳ的蛋白质水平.结果:TGF-β1转染组细胞上清液中的TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平显著升高,积雪草能显著降低TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平;TGF-β1转染组细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平均显著升高,而CA可显著降低MC细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平;TGF-β1转染组细胞中的Smad 7mRNA水平显著降低,而CA能使Smad 7的mRNA水平显著升高.结论:稳定表达TGF-β1

作者：马继伟；王宏天；刘浩飞；董磊鹏；丁元；白继琼；张翥；东莉洁

来源：中国应用生理学杂志 2018 年 34卷 2期