目的 为深入了解和探索结核分枝杆菌CYP143A1基因(Rv1785c)功能,构建针对该基因的敲除菌株.方法 采用噬菌体介导的基因敲除技术,设计并采用聚合酶链反应(PCR)扩增待敲除基因Rv1785c左、右臂,与p0004s质粒连接,构建同源重组质粒p0004s-△Rv1785c.再将p0004s-△Rv1785c质粒与phAE159质粒连接,构建phAE159-△Rv1785c噬菌粒.将获得的噬菌粒导入耻垢分枝杆菌mc2155,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增收集高滴度噬菌体,转染结核分枝杆菌H37Rv,筛选阳性克隆并通过PCR法及基因测序验证敲除株构建结果.结果 成功构建了包含Rv1785c上下游同源臂的等位交换质粒,并将该质粒与含有分枝杆菌温敏型噬菌体元件的穿梭质粒phAE159连接获得重组噬菌粒,最终经转染进入H37Rv.PCR及基因测序结果表明H37Rv CYP143A1基因敲除菌株构建成功.结论 首次成功构建了结核分枝杆菌H37Rv CYP143A1基因敲除菌株,为后续CYP143A1基因功能研究提供了关键材料,奠定了重要的物质基础.
作者：陈虹彤；卢芸；李国庆；李聪然；游雪甫；杨信怡
来源：中国医药生物技术 2021 年 16卷 5期
