[目的]构建肝癌靶向性葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因重组腺病毒载体.[方法]首先利用现有的腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShuttle-CMV,构建新的不带CMV增强子/启动子而带有polyA加尾信号穿梭质粒,命名为pShuttle2.将AFP增强子、启动子及SEA基因分别从已构建的pKS-EP载体和pMDl8-T-SEA载体上,亚克隆至pShuttle2中,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183.以获得的重组子转染HEK293细胞后制备重组腺病毒,然后感染高表达AFP的肝癌细胞系Hepal-6和不表达AFP的黑色素瘤细胞系B16、成纤维细胞系NIH3T3.采用间接免疫荧光法,经荧光显微镜观察和流式细胞术检测SEA在细胞膜表面的表达.采用3H掺入法检测膜表达的SEA体外诱导淋巴细胞增殖的活性.[结果]SEA能够靶向性地表达在高表达AFP的Hepal-6细胞膜上,在不表达AFP的B16、NIH3T3细胞膜上不表达,并且体外能够诱导淋巴细胞增殖.[结论]成功地构建了肝癌靶向性SEA基因重组腺病毒载体,为进一步研究SEA在肝癌靶向基因治疗中的应用及其抗肿瘤免疫机制奠定了基础.
作者：司少艳；隋延仿；张秀敏；李侠；冯凯；韩瑞刚
来源：中国肿瘤 2007 年 16卷 7期
