目的 通过重组pSG218质粒构建携带超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的pDC318-SEA腺病毒载体,将其扩增纯化,并探讨其潜在的靶向抗肿瘤机制.方法 通过PCR技术,从产 SEA的葡萄球菌标准菌株基因组 DNA中获得 SEA全长基因,酶切后克隆入pSG218质粒,获得重组质粒pDC318-SEA.鉴定正确后,将pDC318-SEA与病毒骨架质粒pPE3-ccdB通过脂质体共转染HEK293细胞,9～14 d出现病毒空斑.提取腺病毒的DNA,进行PCR鉴定.扩增DC318-SEA,氯化铯梯度离心纯化腺病毒,测定病毒滴度.结果 应用PCR验证、双酶切分析、序列测定表明,成功构建了pDC318-SEA质粒,通过同源重组成功获得携带超抗原SEA基因片段的DC318-SEA腺病毒.结论 获得可表达SEA基因的DC318-SEA溶瘤腺病毒载体,为进一步研究该病毒对膀胱肿瘤靶向治疗的作用奠定了基础,该病毒载体应该有巨大的、多靶向性、高效抗膀胱肿瘤作用.
作者：郝林；韩从辉；李怀富；郑小青；贡震；董秉政；范涛；詹鸣
来源：中华临床医师杂志（电子版） 2009 年 3卷 6期
