目的:探讨缺氧条件下,缺氧反应元件启动子-胸苷激酶/丙氧鸟苷(HRE-TK/GCV)系统对骨肉瘤细胞系MG63靶向性杀伤作用.方法:构建由HRE启动子驱动的含潮霉素磷酸转移酶-单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(Hygromycin phosphotransferase-thymidine kinase,HyTK)融合基因的真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,并将其转染入骨肉瘤细胞系MG63.应用PCR和RT-PCR方法检测TK基因的整合及表达;用MTT法和混合共培养实验分别检测转基因细胞在缺氧或不缺氧状态下对GCV的敏感性以及HRE-TK/GCV系统的"旁观者效应";流式细胞仪检测细胞周期改变及电镜观察细胞超微结构变化探讨其作用机制.结果:成功构建了真核表达质粒pBI-HRE-HyTK,得到转基因细胞系MG63TK.检测到MG63TK细胞内TK基因的DNA和mRNA.MG63TK细胞在不缺氧状态下对GCV不敏感,当GCV浓度达50μg/ml时,仅30
作者：王燕；丘钜世；乔慧；汪睿；彭挺生；李扬；EG Van Meir
来源：中国肿瘤临床 2005 年 32卷 2期
