目的 构建一种由缺氧反应元件(hypoxia responsive element,HRE)调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)基因的真核表达载体,观察HRE能否增强HSV-TK/GCV(gancyclovir,GCV)系统对乏氧环境中的人Ewing's肉瘤细胞系SK-ES细胞的杀伤作用,为弥补放、化疗的不足,探索有效的治疗方法.方法 (1)将合成的HRE片断,插入到pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP)的双顺反子荧光蛋白报告基因的真核启动子的增强子部位,获得重组质粒pHRE;以PCR法扩增HSV-TK基因中TK基因片断,将其克隆到pIRES2-EGFP及pHRE的双顺反子荧光蛋白报告基因上游的多克隆位点,获得重组质粒pTK及pHRE-TK.(2)通过脂质体将pHRE-TK、pHRE、pTK及pIRES2-EGFP导入SK-ES细胞,分别在乏氧(O2浓度为3
作者：司英健；光丽霞；袁发焕；张克斌
来源：中华儿科杂志 2006 年 44卷 8期
