为定向编辑丹参苯丙烷代谢途径中关键酶基因SmPAL1构建CRISPR/Cas9载体,通过在线软件设计CIRSPR/Cas9靶位点,采用体外酶切法进行体外靶点效率检测,筛选活性高的序列,构建到CRISPR/Cas9载体中.设计了3个可能的CRISPR/Cas9靶位点(SmPAL1-g1,SmPAL1-g2,SmPAL1-g3),通过体外靶点效率检测,其活性分别为53.3％,76.6％,10.0％,将筛选出活性较高的2个靶位点SmPAL1-g1和SmPAL1-g2构建到载体VK005-03中并命名为VK005-03-g1和VK005-03-g2.测序结果显示,设计的2个CRISPR/Cas靶位点全部插入到VK005-03中,载体构建成功.
作者：邱镜仁；苏钺凯；宋振巧；房信胜；李景宇；仉劲；王建华
来源：中国中药杂志 2018 年 43卷 21期
