目的 探讨以重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus of the serotypes 2,rAAV2)为载体对体外培养的大鼠耳蜗血管纹缘细胞(Marginal cells,MCs)转染锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD),获得高表达MnSOD转基因缘细胞的可行性.方法 实验组按感染复数(MOI)为104v.g./cell对体外培养的血管纹缘细胞转染rAAV2-MnSOD-EGFP,同时设转染rAAV2-EGFP缘细胞作为空载对照组.未转染细胞为空白对照组.荧光显微镜下每2d观察1次MCs的绿色荧光蛋白(Enhenced green fluorescent protein,EGFP)表达情况.比色法测定各组MCs的MnSOD活性.激光共聚焦显微镜下观察转染rAAV2-MnSOD-EGFP后MnSOD的表达,免疫印迹法(Western blot)定量分析MnSOD的表达.结果 (1) 各组MCs转染后,生长正常,空载对照组MCs转染rAAV2-EGFP后2天开始出现微弱EGFP的表达.1周后至高峰;实验组转染rAAV2-MnSOD-EGFP后4 d出现EGFP的表达,10 d至高峰,且持续表达于细胞培养的整个期间.EGFP的表达在荧光显微镜490 nm波长激发光下呈黄绿色,弥漫于整个胞质.(2)对激光共聚焦显微镜及Western blot的检测结果进行分析,实验组较空载对照组和空白对照组的MCs中MnSOD的表达明显升高.差异有统计学意义.结论 rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外

作者：李隽；杨阳；孔维佳；胡钰娟

来源：中华耳科学杂志 2008 年 6卷 2期