目的:探讨C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)相互作用参与调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测RA-FLS和正常成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞C-Fos mRNA和蛋白表达水平。将RA-FLS细胞分为C-Fos过表达组(转染pcDNA3.1-Myc-C-Fos质粒)、过表达对照组(转染pcDNA3.1-Myc空质粒)、C-Fos沉默组(转染siRNA-C-Fos)、沉默对照组(转染siRNA-NC)和空白对照组(未加任何处理)。细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞增殖能力,流式细胞实验检测各组细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测各组细胞C-Fos、MAPK14、p-MAPK14、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验检测C-Fos和MAPK14在细胞中的定位关系。免疫共沉淀方法检测C-Fos-MAPK14的相互作用关系。采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析,正态分布的数据以
±
s表示,2组间比较采用独立样本
t检验;多组比较采用应采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-
t检验。
结果:RA-FLS细胞中C-Fos mRNA(5.37±0.91)相对表达量明显高于FLS细胞(1.46±0.32)(
t=9.94,
P<0.001)。C-Fos在RA-FLS蛋白水平(1.12±0.
作者:南鹤;张锌;李爽
来源:中华风湿病学杂志 2022 年 26卷 8期