目的 寻找休眠结核分枝杆菌复苏的关键基因,探讨结核分枝杆菌复苏的机制.方法 取改良7H9培养基培养20 d的结核分枝杆菌标准株H37Rv作为对数生长期的活跃结核分枝杆菌,提取其RNA.将一部分该菌株在37℃密封无氧培养45 d左右,加入亚甲蓝作为无氧标志,即获得休眠菌.向休眠菌中加入复苏促进因子,37℃有氧培养3 d,提取休眠复苏期结核分枝杆菌的基因组RNA.用DNA酶处理RNA并回收RNA,用mRNA纯化试剂盒纯化RNA.利用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术分析休眠复苏期和活跃期结核分枝杆菌的基因组mRNA的表达差异,并通过基因克隆、测序和序列分析,寻找差异表达基因.实时荧光定量PCR鉴定差异表达基因.结果 以活跃期结核分枝杆菌cDNA为检测子的正相杂交和以休眠复苏期结核分枝杆菌cDNA为检测子的反相杂交各自高表达或特异性表达的片段都得到了选择性扩增,杂交产物经连接pTA2载体、转化至大肠杆菌DH5?和蓝白斑筛选,正相杂交获得78个阳性菌落,反相杂交获得46个阳性菌落.阳性单个菌落经液体LB培养基培养,以菌液为模板,T7、M13为引物,扩增插入片段,能扩增到明显的条带,且＞350 bp的条带为阳性.正相杂交得到66个阳性扩增带,反相杂交得到39个阳性扩增带.这105个阳性扩增带的菌液经测序分析,则正
作者：刘忠泉；张宗德；邢爱英；陈曦；李自慧；古淑香；贾红艳；杜博平；马屿
来源：中华结核和呼吸杂志 2008 年 31卷 6期
