目的 了解大鼠血管钙化过程中血管组织基因表达的改变.方法 选取6周龄SPF级雄性SD大鼠24只,随机分成钙化组和对照组(各12只),钙化组大鼠制作血管钙化模型(VDN).两组大鼠于实验第8周处死后测定动脉组织钙含量并作病理检查.提取两组大鼠主动脉中膜RNA,反转录成cDNA,采用抑制消减杂交法(SSH)分离钙化组较正常组高表达基因的cDNA片段,将差异片段与PMD18-T质粒载体连接起来,热转化法转化感受态菌DH-5α,建立钙化组与对照组之间的差异表达cDNA文库.菌落PCR法鉴定重组载体,测序阳性克隆,BLAST比对分析测序结果.随机对Nell1等6个基因进行差异表达的RT-PCR验证.结果 (1)病理检查示钙化组大鼠主动脉中膜扭曲并见明显钙盐沉积,对照组大鼠主动脉中膜无任何钙盐沉积.(2)血管组织钙测定示钙化组和对照组大鼠分别为(15.34±2.51)mg/g和(5.20±0.75)mg/g,钙化组大鼠血管组织钙含量显著高于对照组(P<0.01).(3)采用SSH方法成功构建血管钙化的差减文库,对正反双向差减文库进行菌落PCR鉴定后分别获得92个阳性克隆(正向文库)和18个阳性克隆(反向文库),插入片段的大小主要集中于150～400bp.对所获阳性克隆进行测序和BLAST比对分析,获得钙化相关43个上调基因和11个下调基因.RT-PCR验证示CytoP450、Nell1等5个基因在钙化组和对照
作者：吴秀娟；刘毅；孙文学；杜晓红；张媛元；徐利鸳
来源：中华肾脏病杂志 2010 年 26卷 7期
