目的 在大肠杆菌中表达小鼠重组釉蛋白32 000多肽,为进一步制备抗鼠釉蛋白抗体和釉蛋白功能研究奠定基础.方法 利用聚合酶链反应(PCR)法扩增出编码小鼠釉蛋白32 000多肽的cDNA序列,将所得基因片段插入pGEM-T Easy质粒载体,转化大肠杆菌JM109后挑取阳性克隆,提取重组质粒DNA,并经酶切鉴定后将所克隆的序列312 bp片段连入原核表达载体pGEX-4T1,并于大肠杆菌BL21中诱导表达,行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.结果 成功构建了重组表达载体pGEX-4T1-EN312,并经异丙基硫代半乳糖苷诱导后,可见相对分子质量(Mr)为47×103的融合蛋白.结论 利用pGEX-4T1-EN312-BL21体系成功获得了小鼠重组釉蛋白32 000多肽在大肠杆菌中的原核表达和初步纯化.
作者：吕平；田华；高学军
来源：中华口腔医学杂志 2011 年 46卷 z1期
