目的观察羧胺三唑对肺腺癌细胞A549细胞自噬的影响，探究自噬调节在羧胺三唑抗肿瘤增殖作用中的角色。方法 SRB法测定羧胺三唑对A549细胞的体外增殖抑制作用，Logit软件计算半数抑制浓度（ IC50）；AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术测定羧胺三唑给药48 h诱导A549细胞的凋亡率；Western blot检测羧胺三唑给药24 h后LC3-Ⅱ蛋白水平；EGFP-LC3质粒转染观察细胞自噬泡斑点情况；透射电子显微镜（ TEM）实验观察细胞自噬超微结构；采用溶酶体蛋白酶抑制剂评价羧胺三唑对自噬潮的影响；激光共聚焦显微镜结合MDC荧光染料观察细胞自噬溶酶体水平；流式细胞术结合MDC染色检测羧胺三唑对细胞自噬溶酶体的增加百分率。结果羧胺三唑剂量依赖性地和时间依赖性地抑制A549细胞增殖，72 h的IC50＝（13.81±1.15）μmol/L，83 h的IC50＝（5.86±1.06）μmol/L。羧胺三唑40μmol/L诱导A549细胞凋亡率为（18.7±1.9）％，P＜0.01。羧胺三唑能增加A549细胞LC3-Ⅱ蛋白表达水平，增加细胞EGFP＋-LC3亮点数目。电镜超微结构结果表明羧胺三唑作用24 h引起A549细胞自噬泡增多。在溶酶体蛋白酶抑制剂E64 d/pepstatinA存在下，羧胺三唑作用24 h未进一步升高LC3-Ⅱ蛋白水平。羧胺三唑作用A549细胞24 h显著增强自噬溶酶体水平（ P＜0.05
作者：朱灵芝；陈晨；罗丽丰；鞠瑞；武丹威；郭磊；朱蕾；李娟；叶菜英；张德昌
来源：中华临床医师杂志（电子版） 2013 年 11期
