目的 评价β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制内毒素诱导人肺微血管内皮细胞NF-κB激活中的作用.方法 将人肺微血管内皮细胞以1× 105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法,将其分为5组(n=20):空质粒转染组(C组)、脂多糖(LPS)+空质粒转染组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+LPS+空质粒转染组(P+LPS组)、LPS+含β-抑制蛋白-1短发卡RNA(shRNA)的质粒转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+LPS+含β-抑制蛋白-1shRNA的质粒转染组(P+LPS+shRNA组).以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L B-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞,孵育24 h时加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h时加入终浓度为0.1μg/ml的LPS,孵育1h,进行下述指标的测定.取上清液,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,收集细胞悬液,测定血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达、NF-κB活性、NF-κB抑制蛋白(I-κB)及β-抑制蛋白-1的表达水平.结果 与C组比较,LPS组和LPS+shRNA组上清液LDH活性升高,VCAM-1表达上调,NF-κB活性升高,I-κB和β-抑制蛋白-1的表达下调(P<0.01);与LPS组比较,P+LPS组上清液LDH活性降低,VCAM-1表达下调,NF-κB活性降低,I-κB和β-抑制蛋白-1的表达上调(P<0.05或0.01),P+LPS+shRNA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P+LPS组
作者:王轶芃;詹佳;张怀奇;张宗泽;陈凯;王焱林
来源:中华麻醉学杂志 2015 年 35卷 6期