目的：研究晚期氧化蛋白产物( AOPP )通过 NADPH 氧化酶途经诱导小鼠成骨样细胞(MC3T3-E1)产生ROS。方法实验分为空白对照组、RSA(鼠血清白蛋白)组、AOPP组。培养MC3T3-E1细胞,加入RSA和不同浓度的AOPP,用2,7-二氯二氢荧光素二乙酯为荧光探针流式细胞仪检细胞内活性氧簇(ROS)的生成量。在阻断实验中,MC3T3-E1细胞分别与各种可能产生活性氧的酶的抑制剂孵育后加入AOPP,观察阻断剂对ROS生成的阻断作用。采用Western印迹和免疫荧光法观察NADPH氧化酶亚基的变化。结果分别采用50、100、200μg/ml AOPP刺激MC3T3-E1细胞,细胞ROS的生成随着AOPP浓度的升高而逐渐增加,其中200μg/ml AOPP产生的ROS最多(P<0.05)。 AOPP诱导MC3T3-E1生成ROS还表现为时间依赖性,AOPP刺激30 min即可引起ROS生成增加(P<0.05),3 h达峰。加入不同的酶阻断剂后,仅NADPH氧化酶抑制剂二苯碘鎓( DPI)、夹竹桃麻素( apocynin)、胞浆型超氧化物歧化酶C-SOD抑制了ROS的生成(P<0.05)。同时,AOPP刺激后p47phox有明显的膜迁移,并可诱导MC3T3-E1细胞Nox4蛋白表达上调。结论 AOPP通过NADPH氧化酶途径诱导MC3T3-E1细胞产生ROS,推测这可能是AOPP参与骨质疏松发病的机制。
作者：娄爱菊；吴炜戎；何可人；蔡梓红；林启旺；胡梦琳；莫剑玲；蔡晓燕；谢启新；蒋春梅；王簕
来源：中华内分泌代谢杂志 2016 年 32卷 5期
