目的:研究叉头状转录因子O1(FoxO1)调节高糖下小鼠足细胞上皮间质转分化及与转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路的关系。方法分别将持续激活突变型FoxO1慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)、FoxO1短发夹样RNA慢病毒载体(LV-FoxO1-shRNA)和空慢病毒载体(LV-NC)转染足细胞。实验分5组:正常糖浓度组(5.6 mmol/L,A组)、高糖组(25 mmol/L,B组)、高糖+LV-CA-FoxO1组(C组)、高糖+LV-FoxO1-shRNA组( D组)、高糖+LV-NC组( E组)。各组培养24、48、72 h后,实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测FoxO1、TGF-β1、Smad3、nephrin、desmin的表达水平;细胞免疫荧光法观察FoxO1在足细胞中的定位;酶联免疫吸附法检测72 h上清中TGF-β1水平。结果与A组相比,B组FoxO1 mRNA及蛋白表达无变化(均 P>0.05),磷酸化 FoxO1(p-FoxO1)/FoxO1升高,TGF-β1、Smad3 mRNA 及蛋白表达升高, p-Smad3/Smad3升高,nephrin表达减少,desmin表达增多,且nephrin及desmin变化呈时间依赖性(均P<0.05)。与 B 组相比, C 组 FoxO1 mRNA 及蛋白表达升高, p-FoxO1/FoxO1降低, TGF-β1表达减少, p-Smad3/Smad3降低,nephrin表达增多,desmin表达减少(均P<0.05)。 D组与B组相比,FoxO1 mRNA及蛋白表达降低,p-FoxO1/FoxO1降低,TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白表达升高,p-Sma
作者:杜萌萌;王庆祝;秦贵军;李雯;马晓君;吴丽娜;赵水英;郭丰;王欢欢
来源:中华内分泌代谢杂志 2016 年 32卷 9期