目的 构建人α1微球蛋白(α1-MG)基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、纯化,为制备α1-MG诊断试剂中原料抗体、标准品及质控品奠定基础.方法 从人胚胎肝脏中提取总RNA,利用反转录聚合酶链反应技术扩增α1-MG基因.然后克隆至PQE30表达载体,转化大肠杆菌M15中进行表达,并经镍固定金属亲和层析进行纯化,蛋白质印迹进行免疫学鉴定.结果 获得了与Gene bank报道一致的α1-MG基因片段,成功构建了成熟人α1-MG的原核表达载体PQE30-α1-MG,质粒转化大肠杆菌并经1 mmol/L异丙基硫代半乳糖诱导5h后,可表达相对分子质量约25 000的外源蛋白,表达的α1-MG大部分在包涵体中,并可经镍固定金属亲和层析纯化,纯化有效率95％以上,BCA法测定纯化的α1-MG蛋白含量为25 mg/L.蛋白质印迹表明,该蛋白可与抗入α1-MG天然抗体反应.结论 通过基因工程方法可获得高效表达的重组α1-MG蛋白,该蛋白具备同天然α1-MG相同的生物学特性,为下一步进行α1-MG相关研究及应用奠定基础.
作者：魏雁虹；耿辉；宋帅；孟莹；杨广民
来源：中国医药 2013 年 8卷 11期
