目的 构建过表达神经生长因子β亚基(hNGFβ)大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs),为基因修饰ADSCs移植治疗神经损伤性勃起功能障碍(ED)大鼠模型提供种子细胞.方法 获取人NGFβ基因,并与线性化的慢病毒载体pLV5-EGFP定向克隆连接.构建pLV5-hNGFβ-EGFP穿梭质粒转染HEK293T细胞,采用Western Blot检测hNGFβ基因在HEK293 T细胞中的表达情况.利用LV5慢病毒包装系统包装产生重组慢病毒,包装后扩增纯化并测定病毒滴度.hNGFβ基因重组慢病毒转染大鼠ADSCs,观察EGFP表达情况,用Western Blot检测hNGFβ基因表达情况.结果 经实时荧光定量(PCR)鉴定、限制性酶切分析、测序鉴定和目的质粒Western Blot表达检测鉴定,证实pLV5-hNGFβ-EGFP重组慢病毒载体构建成功.重组慢病毒包装成功且病毒滴度为1.0×109 PFU/ml.Western Blot于大鼠ADSCs中检测到约13.5 KDa大小条带,其与hNGFβ蛋白分子量大小相一致.结论 hNGFβ基因修饰的ADSCs构建成功,从而为基因修饰ADSCs移植治疗ED提供了良好的基因工程细胞.
作者：齐涛；王博；吴杰英；陈俊；蒋满波；叶雷；张滨
来源：中华腔镜泌尿外科杂志（电子版） 2016 年 10卷 3期
