目的 构建pcDNA3.1(+)胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达。方法 将GDNF逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上，经酶切鉴定及测序分析并以FuGene6介导法转染真核细胞，了解其在细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性。结果 RT-PCR产物为640bp特异片段，pcDNA3.1(+)GDNF重组体经酶切后分别出现640bp和300bp片段，测序分析与文献报道结果完全一致，表明重组pcDNA3.1(+)GDNF表达质粒克隆成功。可见pcDNA3.1(+)GDNF质粒在真核动物细胞中得到表达，GDNF蛋白能够刺激含多巴胺的细胞生长，表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有活性的GDNF蛋白。结论 以FuGene6介导pcDNA3.1(+)GDNF质粒转染真核细胞为基因治疗帕金森病奠定了一定基础。
作者：赵永波；张莹；王枫；王乔树；王维治；李钰；张贵寅
来源：中华神经科杂志 2001 年 34卷 1期
