目的 在原核细胞中表达并纯化HIV相关脑病(HIV-associated dementia,HAD)患者基底核(basal ganglia,BG)来源HIV-1 Tat蛋白,研究其对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)活性的影响.方法 以本室保存的重组质粒pGEX-KG-tat为模板扩增tat,构建重组表达载体pET-32a-tat.转化BL21(DE3)并用IPTG诱导表达Tat蛋白.Tat蛋白经镍亲和层析柱和凝胶过滤预装柱纯化、SDS-PAGE和Western blot(WB)鉴定后浓缩,测定BCA蛋白浓度,cck-8检测不同浓度Tat对HUVECs活性的影响.结果 在BL21大肠杆菌中表达、纯化得到了纯度较高的Tat蛋白,BCA测定浓度为0.47 mg/ml.随着Tat浓度的增加,HUVECs活性逐渐降低,与阴性对照组相比,100 ng/ml、200 ng/ml两组细胞活性差异均无统计学意义(P>0.05),300 ng/ml、400 ng/ml、500 ng/ml、1000 ng/ml四组细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05),但四组组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 在原核细胞中高效表达了具有生物学活性的HIV-1 Tat蛋白,浓度达到300 ng/ml可显著降低HUVECs的活性.
作者：郑文慧；秦泽明；李昕；曹馨月；单晓宇；温红玲；王志玉；黄涛；赵丽
来源：中华实验和临床病毒学杂志 2018 年 32卷 6期
