目的:探讨HIV-1负调控因子(Nef)在HIV-1神经致病性中的作用。方法:从HIV-1相关痴呆(HIV-associated dementia, HAD)患者的中枢神经系统(central nervous system, CNS)和外周5个部位(基底结、额叶皮质、脑膜、颞叶皮质和脾)中获得5株不同的HIV-1
nef基因，与载体pcDNA3.1连接构建重组的pcDNA3.1-
nef真核表达载体，转染人神经胶质瘤细胞U87。转染后22 h、27 h、32 h、37 h和42 h经免疫组化法和Western blot检测Nef蛋白表达情况，采用JEDA801D和JD-801软件对结果进行半定量分析。转染后27 h～62 h，每间隔5 h收集U87细胞的培养上清，ELISA测定上清中两种细胞因子TNF-α和IL-1β的含量，分析两种细胞因子的动态表达情况。
结果:成功构建5株来自一例HAD患者不同部位组织的
nef基因的重组的pcDNA3.1-
nef真核表达载体，转染U87细胞。免疫组化实验的结果显示，Nef蛋白在转染后42 h开始表达，Western blot进一步证实了这一结果。ELISA结果显示，转染后22 h、27 h、32 h、37 h，各组上清中细胞因子的含量随时间逐渐增多，但各组间的差异均无统计学意义(TNF-α：F＝0.445,
P＝0.837; F＝0.579,
P＝0.742; F＝0.617,
P＝0.714; F＝2.728,
P＝0.057。IL-
作者：李丹迪；秦泽明；贺淑婷；温红玲；黄涛；张克胜；赵丽
来源：中华实验和临床病毒学杂志 2021 年 35卷 3期
