目的为进行基因转移阻断T细胞共刺激通路诱导移植免疫耐受的研究,构建携带融合基因CTLA4-Ig的重组腺病毒载体.方法构建含人CTLA4-Ig的重组腺病毒载体质粒pShuttle-Tracker-CMV-CTLA4-Ig,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1/△E1、△E3共转化大肠杆菌BJ5183,经细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-Tracker-CTLA4-Ig,转染293细胞,制备携带CTLA4-Ig的重组腺病毒,体外感染L-O2细胞72h后ELISA检测其外分泌性表达.结果获得携带CTLA4-Ig的重组腺病毒,滴度为6×1013 PFU/L;在其感染的L-O2细胞培养上清中能检测到可溶性重组蛋白CTLA4-Ig的表达(P/N=4.6,阳性).结论制备的重组腺病毒在体外能有效感染L-O2细胞,受感染细胞能表达、分泌可溶性的融合蛋白CTLA4-Ig;为进行体内移植免疫耐受的基因治疗研究奠定基础.
作者：朱斌；杨甲梅；钱其军；崔贞福；石文芳；吴孟超
来源：中华实验外科杂志 2003 年 20卷 1期
