目的建立从人肾癌组织中提取、纯化热休克蛋白(HSP)gp96-肽复合物的方法,并检测其体外免疫效应.方法采取三步蛋白纯化法从人肾癌患者肿瘤组织中提取、纯化HSPgp96-肽复合物,SDS-PAGE、Western blot鉴定HSPgp96-肽复合物.应用酶联免疫斑点(ELISPOT)法检测HSPgp96-肽复合物、单纯多肽产生γ-干扰素效应T细胞频数的体外免疫活性.结果应用该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot特异性鉴定,证实是HSPgp96-肽复合物;蛋白得率为每g湿重肾癌组织可纯化HSPgp96-肽复合物40～60 μg.γ-干扰素 ELISPOT检测,HSPgp96-肽复合物组产生γ-干扰素效应T细胞频数最高(287.50±22.34),以后依次为单纯多肽组(135.25±12.80)、阳性对照组组(102.25±14.76)、阴性对照组(35.50±11.10),各组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);HSPgp96-肽复合物组与单纯多肽组、阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);单纯多肽组与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论三步蛋白纯化法不仅操作简便、重复性高,而且提取的HSPgp96-肽复合物具有高获率、高纯度、高特异性及高免疫效应等优点.
作者：张杰；殷勇；田波；孟颂东；张孝斌
来源：中华实验外科杂志 2005 年 22卷 6期
