目的 观察DNA甲基化对Ki-67启动子转录活性的影响.方法 使用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,使用甲基化酶(M.SssI、M.HpaII、M.HhaI)诱导Ki-67启动子DNA片段发生不同程度的甲基化,将甲基化的启动子片段插入pGL3-Basic载体得到甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒,并以非甲基化Ki-67启动子荧光素酶报告质粒作为对照,分别转染正常细胞(HL-7702、HUVEC)和肿瘤细胞(A549、EJ、Kert-3、Hela和SGC-7901),使用双荧光素酶报告基因检测系统测定甲基化的Ki-67启动子在这些细胞中的转录活性.结果 甲基化Ki-67启动子的转录活性均有不同程度的下降,其下降幅度依次为M.SssI处理组＞M.HhaI处理组＞M.HpsII处理组,其中M.SssI处理组启动子的转录活性几乎完全消失.结论 Ki-67启动子的甲基化抑制了其转录活性,抑制程度与DNA甲基化程度和甲基化位置有关.
作者：李望；钱国伟；徐为；田卉；李连涛；刘俊杰；陈菲菲；李慧中；章龙珍；郑骏年
来源：中华实验外科杂志 2011 年 28卷 6期
