目的 优化构建新型胰腺癌MUC1 DNA疫苗.方法 目的基因增加重复序列可变数目串联重复序列(VNTR),并分别插入乙型肝炎病毒(HRV)核心抗原基因(C1-144)和/或小鼠白细胞介素(IL)-18基因序列,插入真核表达载体pIRES2-EGFP,构建成优化重组质粒,酶切及测序鉴定.4种优化重组质粒分别体外转染2×106个293T细胞和Panc-02细胞,观察转染后48 h后绿色荧光表达,评估转染效率收集转染后的细胞,裂解后Western blot检测目的基因的表达,验证各优化重组质粒在真核细胞中的表达.结果 双酶切鉴定证实了pIRES2-EGFP-A-B插入了1100 bp大小片段,pIRES2-EGFP-A-C和pIRES2-EGFP-A-B-C重组质粒都插入了1200 bp大小片段,分别与目的基因大小一致.在转染转染后48 h后,293T和Panc-02均可见绿色荧光.Western blot检测可见在Panc-02细胞中pIRES2-EGFP-A-B质粒、pIRES2-EGFP-A-B-C质粒均可表达乙肝病毒核心抗原C1-144,pIRES2-EGFP-A-C质粒、pIRES2-EGFP-A-B-C质粒均可表达小鼠IL-18 (mIL-18).在293T细胞中,pIRES2-EGFP-A质粒、pIRES2-EGFP-A-B质粒、pIRES2-EGFP-A-C质粒、pIRES2-EGFP-A-B-C质粒均表达VNTR.结论 优化构建的4个重组质粒均可在真核细胞中表达插入的目的抗原.

作者：吴文川；靳大勇；楼文晖；戎叶飞；王单松；秦新裕

来源：中华实验外科杂志 2013 年 30卷 5期