目的 观察自噬在蛋白酶体抑制剂MG132诱导的食管鳞癌细胞死亡中的作用.方法 用20 μmol/L MG132和(或)5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理人食管鳞癌EC9706细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染色流式细胞术检测细胞凋亡率；吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观察细胞酸性自噬泡的变化；Western blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1及凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-9的表达.结果 流式细胞仪检测示MG132、3-MA及MG132+ 3-MA组细胞凋亡率为(57.37±0.81)％、(9.43±0.15)％、(79.40±0.92)％.MG132组经吖啶橙染色后,细胞内酸性自噬泡明显增加,呈明亮的红色荧光,而加入3-MA联合作用后,则上述现象被抑制.Western blot结果示对照组、MG132、3-MA及MG132+ 3-MA组Beclin-1和Caspase-9相对灰度值分别为0.57 ±0.01、0.90 ±0.03、0.49 ±0.14、0.65±0.01和0.61±0.05、0.88±0.02、0.70 ±0.01、0.98±0.02.结论 MG132可以诱导食管鳞癌细胞凋亡,并可激活其自噬；3-MA可能通过上调Caspase-9的表达增强MG132对食管癌细胞的杀伤作用.
作者：潘丽红；赵松；党丽峰；杨洋；刘东雷；吴恺
来源：中华实验外科杂志 2013 年 30卷 11期
