目的 验证丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)是否为前列腺癌细胞中微小RNA(miRNA,miR)-129的靶基因,并探讨其分子调控机制.方法 应用生物信息学软件预测并筛选靶基因;构建靶基因3'端非编码区域(3'-UTR)双荧光素酶野生型载体及结合位点突变型载体,分别与miR-129模拟物片段(has-miR-129 mimic)和无关序列(scramble)对照共转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后行双荧光素酶报告基因检测;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染48 h后PC-3细胞中靶基因的mRNA表达;Western blot检测靶基因及其下游调控基因的蛋白表达.结果 筛选MAPK1为miR-129可能的靶基因;过表达miR-129后,野生型pMIR_ MAPK1_WT的荧光素酶活性值(0.495±0.070)明显低于scramble对照组(1.000±0.128,P＜0.01),突变型各组与对照组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);过表达miR-129后MAPK1 mRNA相对表达量(0.720±0.041)低于scramble对照组(1.000±0.056,P＜0.01);过表达miR-129后MAPK1、磷酸化转录信号转导子与激活子3 (p-STAT3)与bcl-xL的蛋白表达量下降(P＜0.01),总STAT3蛋白表达量无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK1可能是miR-129直接作用的靶基因,前列腺癌细胞中miR-129可通过抑制MAPK1信号通路的活性发挥抑癌作用.

作者：张平；廖陈曾；肖建华；董自强；颜克钧

来源：中华实验外科杂志 2016 年 33卷 6期