目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-30a影响胃癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制.方法 将Snail 3'端非编码区(3'-UTR)野生型及突变型载体与miR-30a模拟物或miR-30a阴性对照共转染胃癌SGC7901细胞,双荧光素酶报告基因验证Snail是否为miR-30a下游的靶基因.实验分miR-30a组(转染miR-30a mimics)、miR-30a-Snail组(转染miR-30a mimics及Snail过表达质粒)、空白对照组(转染空白质粒NC)3组;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测各组细胞上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平.结果 双荧光素酶实验结果显示,共转染miR-30a和Snail基因3'-UTR质粒后,细胞中荧光素酶活性明显降低,miR-30a能与Snail的3,-UTR结合,并抑制其表达.Transwell迁移和侵袭实验结果显示,miR-30a组穿过细胞数分别为[(100.0±5.8)、(56.8±3.7)],较空白对照组[(197.3±11.6)、(151.3±10.6)个]、miR-30a-Snail 组[(183.0±7.4)、(163.0±7.4)个]明显降低,差异有统计学意义(P =0.002、0.000).Western blot 实验结果显示,E-cadherin蛋白水平,miR-30a组(38 954±173)较空白对照组(3416±20)及miR-30a-Snail组(4097 ±27)明显上升,
作者:樊瑞智;李海青;曹允友;徐溢新;宋虎;白津;徐为;郑骏年;宋军
来源:中华实验外科杂志 2017 年 34卷 11期