目的 观察磷酸肌醇3激酶(PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂NVP-BEZ235对奥沙利铂诱导的人结肠癌HCT116细胞凋亡的影响.方法 不同浓度的奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235处理体外培养的结肠癌HCT116细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞生存率的影响.流式细胞术(FCM)检测奥沙利铂和(或)PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞凋亡率的影响.免疫荧光检测奥沙利铂和(或)PI3 K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对HCT116细胞核形态的影响.Western blot检测奥沙利铂和(或)H3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235对DNA损伤标志基因磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)及凋亡相关蛋白表达水平的影响.结果 MTT结果显示,2、4、8、16、32、64 μg/ml奥沙利铂以剂量依赖的方式抑制了HCT116细胞增殖,且约16 μg/ml奥沙利铂能够抑制50%的HCT116细胞增殖;流式细胞术的结果显示,4、16、64μg/ml奥沙利铂作用HCT116细胞24 h后,凋亡率分别是11%、36%和80% (P =0.026);免疫荧光结果显示,奥沙利铂和NVP-BEZ235联合应用明显地增加了HCT116细胞凋亡率,观察到HCT116细胞核明显地发生皱缩;Western blot结果显示,凋亡相关蛋白裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)的表达水平明
作者:王延楠;戚少龙;姜春晓;陈雪松;张佳宇;沈可欣
来源:中华实验外科杂志 2018 年 35卷 2期