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目的 观察氧化低密度脂蛋白(oxidized LDL,Ox-LDL)刺激对体外培养的小鼠肾小球足细胞清道夫受体A (scavenger receptor A,SR-A)表达的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法 体外培养小鼠条件永生性足细胞,以不同浓度Ox-LDL刺激足细胞24 h及以20 mg/L Ox-LDL干预不同时间,酶法检测细胞内胆固醇含量,采用实时荧光定量PCR、Western印迹法检测正常对照组、Ox-LDL刺激组SR-A、nephrin、PTEN的mRNA和蛋白表达水平;DiI标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-Ox-LDL)与足细胞共孵育,免疫荧光观察足细胞对脂质的摄取情况.进一步采用PTEN抑制剂bpv(hOpic) [dipotassium bisperoxo(5-hydroxypyridine-2-carboxyl)oxovanadate(Ⅴ)]、PTEN siRNA以及PTEN腺病毒(adPTEN)双向调控PTEN的表达,观察SR-A、nephrin的表达、足细胞对脂质的摄取情况及细胞内胆固醇含量的变化.结果 小鼠足细胞表达SR-A受体并介导脂质摄取;与对照组相比,Ox-LDL刺激上调足细胞SR-A表达的同时伴有PTEN、nephrin表达下降(均P<0.05),且与Ox-LDL的浓度及作用时间相关;增加PTEN表达能抑制Ox-LDL诱导的SR-A表达水平上调和脂质摄取(均P<0.05),降低细胞内胆固醇含量(P<0.05),上调裂孑隔膜蛋白nephrin的表达(均P<0.05);与之相反,抑制PTEN表达能进一步上调Ox-LDL

作者:左洋洋;剧孟磊;王惠珍;付蕾;文枫;赖宇雄;谢剑腾;王文健

来源:中华肾脏病杂志 2015 年 31卷 10期

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左洋洋;剧孟磊;王惠珍;付蕾;文枫;赖宇雄;谢剑腾;王文健
来源:
中华肾脏病杂志 2015 年 31卷 10期
标签:
足细胞 清道夫受体,A类 PTEN 氧化低密度脂蛋白 Podocytes Scavenger receptors,class A PTEN Oxidized LDL
目的 观察氧化低密度脂蛋白(oxidized LDL,Ox-LDL)刺激对体外培养的小鼠肾小球足细胞清道夫受体A (scavenger receptor A,SR-A)表达的影响,并初步探讨其可能的分子机制.方法 体外培养小鼠条件永生性足细胞,以不同浓度Ox-LDL刺激足细胞24 h及以20 mg/L Ox-LDL干预不同时间,酶法检测细胞内胆固醇含量,采用实时荧光定量PCR、Western印迹法检测正常对照组、Ox-LDL刺激组SR-A、nephrin、PTEN的mRNA和蛋白表达水平;DiI标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-Ox-LDL)与足细胞共孵育,免疫荧光观察足细胞对脂质的摄取情况.进一步采用PTEN抑制剂bpv(hOpic) [dipotassium bisperoxo(5-hydroxypyridine-2-carboxyl)oxovanadate(Ⅴ)]、PTEN siRNA以及PTEN腺病毒(adPTEN)双向调控PTEN的表达,观察SR-A、nephrin的表达、足细胞对脂质的摄取情况及细胞内胆固醇含量的变化.结果 小鼠足细胞表达SR-A受体并介导脂质摄取;与对照组相比,Ox-LDL刺激上调足细胞SR-A表达的同时伴有PTEN、nephrin表达下降(均P<0.05),且与Ox-LDL的浓度及作用时间相关;增加PTEN表达能抑制Ox-LDL诱导的SR-A表达水平上调和脂质摄取(均P<0.05),降低细胞内胆固醇含量(P<0.05),上调裂孑隔膜蛋白nephrin的表达(均P<0.05);与之相反,抑制PTEN表达能进一步上调Ox-LDL