目的 利用同源重组技术构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,初步探讨ampG基因缺失对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响. 方法 PCR分别扩增实验菌株ampG上下游同源臂片段,再利用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR ,SOE-PCR)技术获得ampG基因上下游同源臂融合片段,酶切后克隆至温敏性自杀载体pKO3-km上,构建pKO3-km-ΔampG重组质粒,电转化至肺炎克雷伯菌Kp1和Kp NTUH-K2044 菌株中,通过同源重组技术,利用pKO3-km的温敏特点,筛选出肺炎克雷伯菌ampG基因缺失的突变株;将克隆质粒pACYC184-ampCR分别导入Kp NTUH-K2044的野生型及其ampG基因缺失菌株中,使其获得AmpC酶基因;采用纸片扩散法,以头孢西丁为诱导剂,观察ampG基因缺失前后对肺炎克雷伯菌AmpC酶诱导表达的影响. 结果 成功构建pKO3-km-ΔampG重组质粒,经PCR及DNA测序证实获得肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,与野生型相比,Kp1菌株ampG基因敲除后AmpC酶诱导表型消失,而在获得了外源性AmpC酶基因后, Kp NTUH-K2044菌株AmpC酶诱导表型阳性,其相应的ampG基因缺失株AmpC酶诱导表型阴性.结论 成功构建肺炎克雷伯菌ampG基因缺失突变株,ampG基因缺失后肺炎克雷伯菌AmpC酶不能诱导表达.
作者：王丽；多丽波；李桂玲；张和光；栾英；陈淑娟
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2015 年 35卷 10期
